贝氏柯克斯体实时荧光定量PCR方法的建立及对云南鼠标本检测
亚红祥1
赫兢2
张丽娟3
白丽4
1.中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,北京,102206;大理学院,大理,6710002.解放军第三○二医院,北京,1000393.中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,北京,1022064.大理学院,大理,671000
摘要：目的 建立贝氏柯克斯体荧光定量PCR方法并应用于云南省鼠标本的检测.方法 根据贝氏柯克斯体ISlllla基因设计引物和探针,以克隆的ISlllla基因片断(485 bp)作标准DNA模板,建立实时荧光定量PCR检测方法,并与普通巢式PCR方法进行比较.采用2种方法对云南玉溪自然界采集的鼠各类标本进行检测分析,计算2种方法的检出率.结果 实时荧光定量PCR标准曲线的循环阈值(cycle threshold,Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=-0.999),重复性测试Ct变异系数(coefficient of variation,CV)为0.25%～3.98%,灵敏度为巢式PCR的10倍.以其他立克次体和常见病原菌共26种DNA为模板进行特异性检测,结果均为阴性.实时荧光定量PCR检测鼠血、肝脏、脾脏中的贝氏柯克斯体,阳性率分别为32.31%、61.29%、85.19%;巢式PCR法检测相应标本阳性率分别为27.69%、11.29%、74.07%;间接免疫荧光试验检测鼠血清中贝氏柯克斯体IgG抗体阳性率为26.15%.结论 本实验建立的实时荧光定量PCR比巢式PCR敏感,且具有良好的特异性,可用于人群和动物贝氏柯克斯体感染监测及临床标本的检测.
关键词：荧光定量PCR贝氏柯克斯体定量检测
分类号：R376.4(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)R392.11(医学免疫学)
资助基金：中美新发传染病合作项目(1U2GGH000018-01)国家自然科学基金(30771854)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 345-347,350 )
英文信息