H5N1禽流感病毒抗原基因的体外转录及RNA标准品构建
张锦海
王忠灿
郑纪山
吕恒
鲁娟东
顾海涛
王平
王长军
1.南京军区军事医学研究所,2100022.南京军区军事医学研究所,2100023.南京军区军事医学研究所,2100024.南京军区军事医学研究所,2100025.南京军区军事医学研究所,2100026.南京军区军事医学研究所,2100027.南京军区军事医学研究所,2100028.南京军区军事医学研究所,210002
摘要：目的 通过基因克隆和体外转录,获得H5N1禽流感病毒血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、基质蛋白M(M)基因的RNA片段,为病原学检测提供阳性定量标准品.方法 设计H5N1禽流感病毒的HA、NA及M基因全长开放阅读框的克隆引物,提取H5N1禽流感病毒总RNA,用RT-PCR获得相应片段,分别连接至Pgem-T easy质粒,转化宿主菌XL10-Gold,然后提取阳性克隆的重组质粒DNA,测序鉴定后用限制性核酸内切酶Nde I酶切线性化,用T7 RNA聚合酶进行体外转录,产物用Dnase酶处理、纯化后测定浓度,用实时荧光定量PCR构建标准曲线进行验证.结果 获得含H5N1禽流感病毒HA、NA、M基因全长开放阅读框序列的准确定量拷贝数的RNA片段,质量浓度分别为503.9、379.2、437.8ng/μl.结论 获得的RNA片段可作为H5N1禽流感病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品.
关键词：H5N1亚禽流感病毒克隆体外转录
分类号：R575.1(消化系及腹部疾病)
资助基金：国家"十一五"科技重大专项(2009ZX1004-315)国家"十一五"科技重大专项(2008ZX10004-008)江苏省科技支撑计划(社会发展)项目(BE2009621)南京军区重点课题(072043)南京军区重点课题(072044)南京军区面上课题(08MB149)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 26-28 )
英文信息