联合应用泛素分子基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒的构建及鉴定
张亮
于澜
叶伟
李璞媛
张芳琳
程林峰
1.第四军医大学微生物学教研室, 西安,7100322.第四军医大学微生物学教研室, 西安,7100323.第四军医大学微生物学教研室, 西安,7100324.第四军医大学微生物学教研室, 西安,7100325.第四军医大学微生物学教研室, 西安,7100326.第四军医大学微生物学教研室, 西安,710032
摘要：目的 构建含有泛素(ubiquitin , Ub)基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0 . 7和GcS0 . 7重组腺病毒. 方法 通过PCR扩增获得Ub基因, 分别克隆入本室已构建的重组腺病毒转移载体pShuttle-pCAG-GnS0.7和pShuttle-pCAG-GcS0.7中,进一步通过双酶切将转移载体中的嵌合基因分别克隆入腺病毒载体, 得到重组腺病毒载体rAd-pCAG-Ub-GnS0.7和rAd-pCAG-Ub-GcS0.7,使用Pac Ⅰ线性化后转染HEK293细胞,包装后获得重组腺病毒,感染HEK293细胞后用免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay, IFA)检测表达产物. 结果 限制性内切酶酶切鉴定、PCR扩增和测序结果显示,各重组腺病毒转移载体及重组腺病毒载体构建正确. IFA检测到各重组腺病毒中目的蛋白的表达. 结论 成功制备了含有Ub基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7和GcS0.7重组腺病毒, 为进一步研究联合Ub基因的汉滩病毒重组腺病毒的免疫学特性奠定了实验基础.
关键词：汉坦病毒腺病毒科泛素
分类号：R373.32(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(31070810)国家自然科学基金(81001344)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 83-87 )
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