探针ASPCR检测肺炎支原体微量耐药突变A2063G方法的建立
郭东星1
胡文娟2
李丹1
李静宜1
吴赵永1
栗绍刚1
田秀君1
辛德莉1
1.100050,首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所2.100050,首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所;100050北京,民航总医院儿科
摘要：目的 建立能够特异性检测微量肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)A2063G耐药突变基因的特异性扩增等位基因的探针法实时定量PCR(probe-based allele-specific real-time PCR,探针ASPCR)方法.方法 建立特异性检测A2063G耐药突变位点的探针ASPCR方法,并验证其灵敏度、特异度及准确度等性能.结果 特异性扩增2063G和非特异性扩增2063A/G的引物/探针组合分别扩增105拷贝野生基因型(2063A)模板的Ct值的差(△ Ct)高达10.93,能够特异性检测A2063G突变.探针ASPCR方法检测2063G基因型占总MP的比例的准确度可低至1％;检测MP的灵敏度低至10拷贝,检测A2063G耐药突变比例的灵敏度低至0.01％.探针ASPCR方法与前期建立的染料ASPCR方法检测临床样本的MP感染结果一致,MP阳性检出率均为94.83％(55/58),高于传统巢式PCR联合测序方法的检测结果(75.86％,44/58);染料ASPCR方法检测MP耐药率为70.91％(39/55),高于探针ASCR方法的检测结果63.64％(35/55).结论 新建探针ASPCR方法是一种具有高特异度、准确度和灵敏度的快速检测MP微量A2063G耐药突变的方法;与染料ASPCR方法相比,探针ASPCR方法检测耐药MP的灵敏度略低,但其临床样本检测复查率也低于染料ASPCR方法,且其结果判读简单,更适合在临床中应用推广,能够为临床制定MP及耐药MP感染的治疗方案提供理论依据.
关键词：肺炎支原体ASPCR实时定量探针23SrRNAA2063G咽拭子
分类号：R331(人体生理学)R375.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)R349.82(基础医学)
资助基金：北京市科技计划(Z161100000116088)首都卫生发展科研专项(2016-2-2026)
论文发表日期：2022-10-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 418-425 )
英文信息