乙型肝炎病毒X蛋白增强人血管生成因子bFGF基因启动子转录活性
马叶女1
朱文琦2
李波2
侯俊2
卞成蓉2
刘妍1
孙杰2
鲍春梅2
张浩3
李伯安2
1.100039 北京,解放军总医院第五医学中心感染病医学部研究所2.100039 北京,解放军总医院第五医学中心检验科3.065201 廊坊,河北燕达医学研究院科研事业部
摘要：目的 检测乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对人血管生成因子bFGF基因转录的激活作用并确定其作用于bFGF基因启动子的区域,分析HBx激活bFGF基因转录可能的分子机制,为揭示HBx促进肝癌发生的分子机制及发现新的治疗靶点.方法 运用高保真DNA聚合酶从人肝癌HepG2 细胞cDNA文库中扩增出bFGF基因启动子DNA序列;从含完整HBV DNA序列的表达载体中扩增HBx编码序列并克隆入真核表达载体pCDNA3-FLAG中,将HBx表达载体转染人肝癌HepG2 细胞中,裂解细胞进行蛋白SDS-PAGE电泳,Western blot检测HBx蛋白的表达;将HBx表达载体和含bFGF基因启动子不同区段的荧光素酶报告载体共转染肝癌HepG2 和SMMC-7721 细胞,检测HBx对bFGF基因启动子转录活性的影响;运用Western blot检测在肝癌细胞中HBx过表达对ERK磷酸化的影响.结果 成功克隆了HBx并使其在肝癌细胞中得到表达;成功克隆了bFGF基因启动子 2.2 kb、1.4 kb、720 bp和 360 bp的区段;在肝癌细胞SMMC-7721 和HepG2 细胞中HBx的表达能升高bFGF基因启动子的活性,且对上述4 个区段的活性均增加约5 倍;HBx以剂量依赖的方式增强bFGF基因启动子的活性;HBx高表达在肝癌HepG2 细胞中不能升高ERK1/2 的磷酸化水平.结论 HBx能够激活bFGF基因启动子的活性,这种激活作用位于HBx启动子转录起始位点上游 360 bp片段内,HBx促进bFGF基因转录不依赖于ERK1/2的磷酸化作用,提示HBx可能通过其它信号通路作用于bFGF基因的转录过程.
关键词：肝癌发生血管生成因子HBxbFGF基因转录信号转导
分类号：R512.6+2(传染病)
资助基金：河北省创新能力提升计划项目(22567663H)
论文发表日期：2023-12-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 492-496,502 )
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