青霉素结合蛋白2a C-末端在大肠杆菌M15中的表达、纯化及鉴定
和生琦
丁国富
李斌
李军
罗平
董燕
张蓉
颜伟
周红
1.第三军医大学药理教研室,重庆,4000382.第三军医大学药理教研室,重庆,4000383.第三军医大学药理教研室,重庆,4000384.第三军医大学药理教研室,重庆,4000385.第三军医大学药理教研室,重庆,4000386.第三军医大学药理教研室,重庆,4000387.第三军医大学药理教研室,重庆,4000388.第三军医大学药理教研室,重庆,4000389.第三军医大学药理教研室,重庆,400038
摘要：目的 构建含目的基因mecA C末端的重组子并在大肠杆菌M15中进行蛋白表达.方法 采用PCR方法扩增mecA C末端DNA,将其与表达载体pQE30连接;再通过PCR及双酶切鉴定连接产物.将含目的基因片段的阳性重组质粒转化大肠杆菌M15后,用1mmol/L的IPTG进行诱导表达.应用Ni-NTA琼脂糖进行亲和层析纯化目的蛋白,并用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行鉴定.结果 成功构建pQE30-mecA重组表达质粒,转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达,亲和层析纯化获得分子量为39.7 kDa的蛋白;Westem blotting和肽指纹图谱证实该蛋白为带有多聚组氨酸标签的融合蛋白.结论 在大肠杆菌内成功表达具有活性的PBP2a,为后期研究和开发抗MRSA药物奠定了基础.
关键词：金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2a大肠杆菌mecA基因
分类号：R967(药理学)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 28-31 )
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