维生素D3抑制高糖诱导视网膜血管内皮细胞凋亡分子机制研究
刘晓
兰图
刘芳静
蹇京宴
甘榆讯
自贡市第一人民医院 眼科,四川 自贡643000
摘要：目的 探讨维生素D3(VD3)对高糖(HG)诱导的视网膜血管内皮细胞(hRECs)的作用及其分子机制.方法 体外培养hRECs,分为正常浓度(NG)组、高渗组、HG组、HG+阴性对照(NC)组、HG+小干扰RNA靶向的硫氧还蛋白相互作用蛋白(siTXNIP)组、VD3+HG组、VD3+HG+NC组、VD3+HG+硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)+HG组.NG组采用含有5.0 mmol/L D-葡萄糖的培养基培养;高渗组采用含有50.0 mmol/L甘露醇的培养基培养;其余7组用含有50.0 mmol/L的D-葡萄糖培养基培养.其中,HG+NC组、VD3+HG+NC组转染阴性对照无序序列(pcD-NA3.1-scramble);HG+siTXNIP组转染pcDNA3.1-siTXNIP;VD3+HG+TXNIP组转染pcDNA3.1-TXNIP质粒;VD3+HG组、VD3+HG+NC组、VD3+HG+TXNIP组在培养基中加入50.0 nmol/L浓度的VD3;NAC+HG组加入细胞内活性氧簇(ROS)清除剂NAC,浓度为10.0 mmol/L.各组hRECs均培养48 h.采用CCK-8法、流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡情况.采用酶联免疫吸附法检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)含量.采用免疫荧光法检测ROS含量.采用蛋白印迹法检测含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)炎症小体相关蛋白表达情况.免疫共沉淀法检测TXNIP和NLRP3蛋白相互作用.结果 HG环境下,随着VD3浓度的升高,hRECs细胞存活率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05).HG组hRECs细胞凋亡率为(38.65％ ±4.79％)、VD3+HG组hRECs细胞凋亡率为(17.50％ ±3.69％),均显著高于NG组的(2.70％ ±0.78％)、高渗组的(3.65％ ±0.84％),但VD3+HG组hRECs细胞凋亡率显著低于HG组,差异有统计学意义(P<0.05).与NG组、高渗组比较,HG组细胞ROS荧光表达量升高;与HG组比较,VD3+HG组、NAC+HG组细胞ROS荧光表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05).HG组细胞培养上清中SOD、GSH-Px含量显著低于NG组、高渗组,MDA、IL-1β、IL-18含量显著高于NG组、高渗组;VD3+HG组NAC+HG组细胞培养上清中SOD、GSH-Px含量显著高于HG组,MDA、IL-1β、IL-18含量显著低于HG组;NAC+HG组细胞培养上清中GSH-Px含量高于VD3+HG组,差异均有统计学意义(P<0.05).HG组细胞NLRP3、抗人凋亡相关斑点样蛋白包含caspase结构域(ASC)、半胱天冬氨酸酶1前体(pro-caspase-1)蛋白表达量高于NG组、高渗组;VD3+HG组细胞NLRP3、ASC、pro-caspase-1蛋白表达量低于HG组,差异均有统计学意义(P<0.05).与HG组、HG+NC组比较,HG+siTXNIP组、VD3+HG组细胞NLRP3、ASC、pro-caspase-1蛋白表达量降低;与VD3+HG组、VD3+HG+NC组比较,VD3+HG+TXNIP组细胞NLRP3、ASC、pro-caspase-1蛋白表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05).与NG组比较,HG环境下TXNIP和NLRP3蛋白间相互作用增加,而VD3+HG组则抑制这种相互作用.结论 VD3能够抑制高糖诱导的hRECs细胞凋亡,其机制与抑制ROS/TXNIP/NLRP3通路有关.
关键词：维生素D3视网膜血管内皮细胞氧化应激炎症反应
分类号：R774.1(视网膜及视神经疾病)R587.2(内分泌腺疾病及代谢病)
资助基金：四川省卫生计生委科研项目(130855)
论文发表日期：2021-10-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 349-355 )
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