血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-5在创伤性骨关节炎早期软骨细胞凋亡中作用机制
栾海龙1
王铮2
王宁2
孙豪君2
刘斌2
韩文锋3
1.锦州医科大学北部战区总医院研究生培养基地,辽宁 沈阳110016;北部战区总医院 骨科,辽宁 沈阳1100162.北部战区总医院 骨科,辽宁 沈阳1100163.北部战区总医院 骨科,辽宁 沈阳110016;锦州医科大学北部战区总医院研究生培养基地,辽宁 沈阳110016
摘要：目的 探究血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-5(ADAMTS-5)基因对小鼠创伤性骨关节炎(PTOA)早期软骨细胞凋亡的影响及其具体的作用机制.方法 分别随机选择3只8周龄转基因雌性C57BL/6小鼠(实验组),3只8周龄普通雌性C57BL/6小鼠(对照组),构建小鼠双侧膝关节骨折PTOA模型,术后4周取样.采用番红O染色、Mankin评分评估软骨损伤情况,通过TUNEL染色、免疫荧光染色检测软骨细胞凋亡情况,以明确ADAMTS-5对PTOA早期软骨细胞凋亡的影响.此外,利用ADAMTS-5体外转染ATDC5小鼠成软骨细胞系,通过干扰及过表达慢病毒转染方法构建过表达稳转株组、过表达对照组、干扰稳转株组、干扰对照组.采用MTT法检测软骨细胞增殖情况,通过免疫荧光染色观察ADAMTS-5、Caspase-9蛋白的表达情况,以明确ADAMTS-5影响软骨细胞凋亡的分子机制.结果 番红O染色及Mankin评分显示,相较于对照组,实验组小鼠在骨折部位的软骨损伤较轻;TUNEL染色显示,相较于对照组,实验组绿色荧光染色更弱、数量更少;免疫荧光染色显示,相较于对照组,实验组Caspase蛋白红染更弱、数量更少.MTT法显示,第72 h时,与干扰稳转株组及过表达稳转株组相比,干扰对照组及过表达对照组光密度(OD)值显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫荧光染色显示,过表达稳转株组与干扰稳转株组的ADAMTS-5及Caspase-9蛋白表达明显高于过表达对照组及干扰对照组,即随着ADAMTS-5基因的表达,Caspase-9蛋白的含量逐渐增加,最终促使软骨细胞发生凋亡.结论 ADAMTS-5对小鼠PTOA早期软骨细胞凋亡具有促进作用,其可通过促进Caspase-9蛋白的生成加速软骨细胞发生凋亡.
关键词：创伤性骨关节炎血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-5半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9软骨细胞凋亡
分类号：R684(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)
资助基金：辽宁省自然科学基金(20180550185)辽宁省自然基金资助计划(2019-MS-357)
论文发表日期：2021-12-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 426-432 )
英文信息