大肠癌相关抗体Fab段噬菌体呈现库的表达和活性鉴定
孙逊
吴保平
肖冰
张振书
赖卓胜
1.第一军医大学南方医院全军消化病研究所,广东广州5105152.第一军医大学南方医院全军消化病研究所,广东广州5105153.第一军医大学南方医院全军消化病研究所,广东广州5105154.第一军医大学南方医院全军消化病研究所,广东广州5105155.第一军医大学南方医院全军消化病研究所,广东广州510515
摘要：目的利用阳性重组菌XL1-Blue-Pcomb3表达出人源性大肠癌Fab段噬菌体原始库,固相化人大肠癌组织及细胞的相关抗原后对其进行筛选,鉴定筛选后的抗体库与人大肠癌有无特异性的结合活性.方法PCR鉴定XL1-Blue-Pcomb3重链Fd段和κ链的插入率,表达出人大肠癌Fab段原始库.然后提取3例用于构建原始抗体库的致敏大肠癌组织抗原,13例非致敏大肠癌组织抗原及3种体外培养的大肠癌细胞株LoVo、HT-29、LS-174T的抗原,利用3组混合抗原分别对原始抗体库进行3轮筛选,将筛选后的3个三级库等体积混和后通过ELISA及免疫组化鉴定其与人大肠癌组织及细胞是否具有特异性的结合活性,取胃癌、食管癌及正常肠粘膜组织和胃癌、肝癌细胞进行对照研究.结果Fd片段及κ链的插入率分别为40%和70%,Fd片段及κ链均插入质粒Pcomb3的重组率为28%,Fab段基因库库容为2.1×106,3组大肠癌混合抗原分别对原始库进行3轮筛选后,抗体库均得到了不同程度的富集,ELISA及免疫组化显示富集后的抗体库对人大肠癌组织及体外培养的大肠癌细胞均有较特异性的结合活性.结论利用噬菌体抗体库技术筛选到了人大肠癌相关Fab段抗体群,且筛选后的抗体群与人大肠癌抗原有较特异性的结合活性.
关键词：大肠癌噬菌体呈现库Fab段表达
分类号：R735(消化系肿瘤)R392(医学免疫学)
资助基金：广东省自然科学基金(010643)
论文发表日期：2002-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 678-683 )
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