表达幽门螺杆菌过氧化氢酶的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌株的构建
白杨1
张亚历1
王继德1
张兆山2
周殿元1
1.第一军医大学南方医院全军消化病研究所,广东,广州,5105152.军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071
摘要：目的构建表达幽门螺杆菌(Hp)过氧化氢酶的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗.方法采用缺失腺苷酸环化酶(△cya)、环腺苷酸受体蛋白(△crp)及天门冬氨酸β-半醛脱氢酶(△asd)的鼠伤寒沙门菌(X4072)作为宿主,将编码过氧化氢酶的基因CAT插入Asd+的组成型表达载体PYA248,通过两次转化引入宿主菌,构建表达过氧化氢酶基因平衡致死的减毒鼠伤寒沙门重组菌X4072(pYA248-CAT).采用桥联法ELISA测定X4072(pYA248-CAT)培养上清液和裂解上清液中过氧化氢酶的抗原性,参照Meacock的方法及重组菌生长曲线的测定来确定重组菌株的稳定性,通过C57BL/6小鼠口服测定半致死量来确定重组菌的安全性.结果成功构建了表达过氧化氢酶的减毒鼠伤寒沙门菌重组菌株X4072(pYA248-CAT).桥联法ELISA测定表明重组菌X4072(pYA248-CAT)培养上清中过氧化氢酶的含量高于菌体裂解液:重组菌pYA248-CAT在没有选择压力的情况下培养25代,随机挑选的重组菌全部都能生长,且在ELISA测定过氧化氢酶抗原时均显阳性;重组菌的生长曲线测定表明,X4072(pYA248)和X4072(pYA248-CAT)的生长状态基本一致.口服重组菌株X4072(pYA248-CAT)1.0×1010cfu,30 d后C57BL/6存活率仍为100%.结论成功构建了表达过氧化氢酶的无抗性的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗X4072(pYA248-CAT),体外实验表明重组质粒是稳定的,动物实验证明重组菌株是安全的.本研究为防治幽门螺杆菌感染提供了口服活菌疫苗候选株.
关键词：螺杆菌幽门过氧化氢酶沙门氏菌鼠伤寒重组遗传
分类号：R377(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)R378.22(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(102-07-03-06;30270078)军队科研项目(OIMA-132)
论文发表日期：2003-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 101-105 )
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