信号肽-FRET荧光蛋白载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达
孙学刚
宋革
刘靖华
安海燕
李红乐
邢飞跃
张丽华
姜勇
1.第一军医大学全军休克微循环重点实验室,广东,广州,5105152.第一军医大学全军休克微循环重点实验室,广东,广州,5105153.第一军医大学全军休克微循环重点实验室,广东,广州,5105154.第一军医大学全军休克微循环重点实验室,广东,广州,5105155.第一军医大学全军休克微循环重点实验室,广东,广州,5105156.第一军医大学全军休克微循环重点实验室,广东,广州,5105157.第一军医大学全军休克微循环重点实验室,广东,广州,5105158.第一军医大学全军休克微循环重点实验室,广东,广州,510515
摘要：目的构建带TLR4信号肽的增强型青色荧光蛋白(pECFP-C1-SP)和增强型黄色荧光蛋白(pEYFP-C1-SP)的质粒载体,为使用荧光共振能量转移(FRET)技术研究LPS在细胞膜上的受体识别机制提供依据.方法采用点突变技术构建了带TLR4信号肽的载体,用脂质体瞬时转染NIH3T3细胞,观察带信号肽载体和融合蛋白载体在细胞内的表达.结果DNA测序证明所构建的带TLR4信号肽的载体正确;酶切和DNA测序表明融合蛋白载体的构建正确,TLR4信号肽可以使蛋白主要表达在膜上.结论所构建的带信号肽的荧光蛋白载体是正确的,pECFP-Cl-SP和pEYFP-C1-SP能够表达在细胞膜上,可有效地应用于膜蛋白相互作用的研究.
关键词：信号肽荧光共振能量转移膜蛋白相互作用
分类号：Q291(细胞生物学)
资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）(2002CB513005)国家自然科学基金(30030060)
论文发表日期：2003-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 310-312 )
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