日本血吸虫Mr为8000钙结合蛋白基因的表达及其融合蛋白免疫反应性的评价
许行
彭鸿娟
陈晓光
1.第一军医大学寄生虫学教研室,广东,广州,5105152.第一军医大学寄生虫学教研室,广东,广州,5105153.第一军医大学寄生虫学教研室,广东,广州,510515
摘要：目的将亚克隆在pET32a(+)质粒上的日本血吸虫Mr为8 000钙结合蛋白(clcium-bindingprotein,CBP)基因进行表达及蛋白纯化,并对表达产物用Westernblotting及ELISA方法进行免疫反应性的评价.方法将重组表达质粒pET32a(+)-CBP转化人宿主菌BL21中,IPTG诱导表达后超声裂菌,离心后取上清进行SDS-PAGE,观察融合蛋白的表达情况;用金属Ni鏊合物亲和层析树脂(Ni-NTA)柱子纯化目标蛋白;将SDS-PAGE后的蛋白从凝胶转移到聚氟乙烯膜上,分别用6-组氨酸(6-His)抗体、日本血吸虫尾蚴感染6周的兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清作一抗进行免疫印迹,将纯化后的融合蛋白作为包被抗原,ELISA法检测正常兔血清及感染兔血清,对该蛋白的免疫反应性作出评价.结果重组菌株用IPFG诱导后于Mr=29000处有一表达条带,该蛋白与硫氧还蛋白融合表达,带有6-His基团,用抗6-His抗体做免疫印迹有特异性的反应条带,而用尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清做免疫印迹都没有特异性的目标反应带出现,ELISA的结果显示该蛋白与血吸虫感染兔血清没有免疫反应性.结论CBP蛋白与硫氧还蛋白融合表达后为可溶性蛋白且相对分子质量约为29000,该蛋白与尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清均无免疫反应性,这可能与该蛋白为尾蚴期特异性抗原有关.
关键词：血吸虫日本钙结合蛋白基因表达纯化ELISA
分类号：R382.24(医学寄生虫学)Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：联合国发展计划署(UNDP)资助项目(A00690)联合国发展计划署(A00191)
论文发表日期：2003-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 706-708,713 )
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