人脑胶质瘤组织全长cDNA文库的快速构建与鉴定
涂艳阳1
徐如祥1
杨志林1
姜晓丹1
吴曙光2
陈一招1
蔡颖谦1
杜谋选1
高杨2
1.第一军医大学珠江医院神经医学研究所,广东,广州,5105822.第一军医大学药物研究所,广东,广州,510515
摘要：目的采用SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术,快速构建高质量的人脑胶质瘤组织全长cDNA文库.方法提取多份人脑胶质瘤组织标本的总RNA,混合后处理得到纯化的mRNA,利用CDSⅢ/3'PCR引物(含SfiⅠB酶切位点)反转录,用SMARTⅣOligo(dT)(含SfiⅠA酶切位点)作为mRNA5'端延伸出去的模板,合成多出一段SMARTⅣOligo(dT)互补序列的cDNA第一链,进而以此序列为引物合成全长的双链cDNA.双链cDNA经SliⅠ(A＆B)酶切后克隆入经SfiⅠ酶切的λTriplEx2载体,再经噬菌体包装蛋白包装成为cDNA文库.结果获得2.4×106个重组子,重组率达100%,文库扩增后,滴度达4.5×109pfu/ml,插入cDNA平均长度为1.2kb.结论成功构建高质量的人脑胶质瘤组织全长cDNA文库,为进一步筛选、克隆人脑胶质瘤抑癌基因及特异性表达基因奠定基础.
关键词：胶质瘤cDNA基因文库抑癌基因
分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家自然科学基金(30170961)
论文发表日期：2003-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 916-920 )
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