恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶融合蛋白复性及纯化的研究
李妍
宁云山
郝文波
李莉
李明
1.第一军医大学热带医学研究所,广东,广州,5105152.第一军医大学热带医学研究所,广东,广州,5105153.第一军医大学热带医学研究所,广东,广州,5105154.第一军医大学热带医学研究所,广东,广州,5105155.第一军医大学热带医学研究所,广东,广州,510515
摘要：目的建立恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)融合蛋白质的复性和纯化方法.方法将含有恶性疟原虫GDH全长基因的融合蛋白表达质粒GDH/pGEX-4T-1转化到宿主菌BL21,该GDH/GST融合蛋白在IPTG的诱导下获得高水平的表达,经SDS-PAGE分析表达产物主要为不溶性的包涵体.经超声酶解法、离心、变性剂/去污剂洗涤后获得包涵体.包涵体经8 mol/L尿素变性后分别采用分子筛柱层析、透析和稀释3种方法复性,并通过浊度分析、非还原SDS-PAGE等方法比较、优化复性方法和条件.复性后的GDH/GST融合蛋白经过不同柱层析方法进行纯化.结果经SDS-PAGE分析表明,GDH/GST融合蛋白表达量可占到菌体总蛋白的25%左右;浊度分析表明:稀释复性法优于其它两种方法,同时20 mmol/L Tris-HCl、1 mmol/L EDTA、pH8.5及GSSG/GSH=1:10为该融合蛋白稀释复性的最佳条件,其复性回收率可达90%以上.复性产物采用二步阴离子交换层析可获得较好的纯化效果.结论通过稀释复性,二步阴离子交换层析可获得高纯度、具有天然空间构象的重组GDH/GST融合蛋白.
关键词：恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶融合蛋白包涵体复性纯化
分类号：Q544.9(脂类)R382.31(医学寄生虫学)
资助基金：广东省广州市科技攻关项目(2002E3-E4012)
论文发表日期：2003-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1273-1276 )
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