靶向性双自杀基因系统对脐静脉内皮细胞的杀伤作用
黄宗海1
杨文宇1
龚小卫2
钱勇3
车小燕4
1.第一军医大学珠江医院普外科,广东,广州,5102822.第一军医大学病理生理教研室,广东,广州,5105153.广州军区广州总医院放射科,广东,广州,5100104.第一军医大学珠江医院中心实验室,广东,广州,510282
摘要：目的研究腺病毒介导的前药/血管内皮生长因子受体(KDR)启动子-双自杀基因系统对血管内皮细胞的杀伤作用.方法应用PCR扩增出KDR启动子、CD基因、TK基因序列,构建pKDR-CDglyTK质粒;以Adeasy-1系统为载体,采用细菌内同源重组"两步转化法"构建携带KDR启动子调控下的CD与TK的融合基因腺病毒重组质粒pAdKDR-CDglyTK,重组质粒在293细胞中包装成病毒,并进一步扩增、纯化,以不同的感染复数(MOI)体外感染脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),利用重组病毒携带的绿色荧光蛋白(GFP)基因,荧光显微镜下观察重组腺病毒的感染效率,并给予不同浓度的GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),比较GCV(ganciclovir)和/或5-FC联合对转基因HUVEC细胞的杀伤作用.结果成功构建了AdKDR-CDglyTK重组病毒,并高效地转染了HUVEC,其转染效率随重组病毒的MOI增加而升高.被转染的HUVEC对GCV和5-FC高度敏感.另外,MOI一定时,细胞存活率随GCV和5-FC浓度增加递减;GCV和5-FC浓度一定时,细胞存活率随MOI升高而降低.不同前药组细胞存活率结果显示:联合应用GCV+5-FC较单用GCV或5-FC对感染细胞的杀伤作用更强(P＜0.05).结论KDR启动子-双自杀基因系统对脐静脉内皮细胞具有强烈的杀伤作用,其杀伤效率与GCV和5-FC的浓度及重组腺病毒的MOI相关,联合应用GCV和5-FC较单用一种更能有效地杀伤HUVEC.
关键词：肿瘤/治疗基因治疗自杀基因KDR启动子血管内皮细胞
分类号：R394.1(医学遗传学)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2001AA217171)广东省自然科学基金(013072)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 139-143 )
英文信息