"两步转化法"高效制备携带自杀基因的重组腺病毒载体
杨文宇1
黄宗海1
汤福祥1
钱勇2
车小燕3
1.第一军医大学珠江医院普外科,广东,广州,5102822.广州军区总院放射科,广东,广州,5100103.第一军医大学珠江医院中心实验室,广东,广州,510282
摘要：目的采用"两步转化法"高效制备含胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因的腺病毒重组载体.方法将质粒pAdEasy-1线性化后转化于BJ5183菌,制备AdEasy-1细菌;自载体pBS-CD中切出CD基因,亚克隆至穿梭质粒pAdtrackCMV上,构建的pAdtrackCMV-CD线性化后转化AdEasy-1细菌,抽提同源重组腺病毒质粒,Pac Ⅰ酶切后转染293细胞,在293细胞中包装与扩增,利用GFP报告基因进行滴度测定.同时按"一步转化法"进行同样的重组腺病毒制备,比较二者的优劣性.结果"两步转化法"终产物17个克隆中13个正确,正确率为76.5%(13/17);"一步转化法"重组产物17个克隆中有2个正确,正确率为11.8%(2/17),两者具有显著性差异(P=0.00017).结论"两步转化法"细菌内同源重组是一种更高效、更方便的重组腺病毒制备方法.
关键词：肿瘤基因治疗自杀基因腺病毒载体同源重组
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2001AA217171)广东省自然科学基金(013072)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 164-167 )
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