截短形式弓形虫SAG1抗原在大肠杆菌中的可溶性高效表达、纯化及免疫反应性鉴定
言慧
李华
周晓红
吴昆
陈晓光
1.第一军医大学寄生虫教研室,广东,广州,5105152.第一军医大学寄生虫教研室,广东,广州,5105153.第一军医大学寄生虫教研室,广东,广州,5105154.第一军医大学寄生虫教研室,广东,广州,5105155.第一军医大学寄生虫教研室,广东,广州,510515
摘要：目的在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达弓形虫SAG1基因的截短片段,并进行纯化及免疫反应性鉴定.方法利用Nco I、HindⅢ双酶切,从本室建立的pET-30a(+)-SAG1重组质粒中获取SAG1基因的截短片段,并将目的片段连接到经同样双酶切的质粒pET32a中,构建表达重组质粒pET-32a(+)-trSAG1.将重组质粒转入E.coli BL21中并进行诱导表达.表达蛋白经Ni-NTA agarose纯化后,Western-blotting分析其免疫反应性.结果成功构建重组质粒pET-32a(+)-trSAG1,通过IPTG诱导得到了以可溶性形式表达的重组SAG1蛋白,相对分子质量40000,Western-blotting结果显示纯化的重组蛋白具有良好的免疫反应性,ELISA试验表明重组SAG1蛋白能被弓形虫免疫兔血清及弓形虫感染人血清识别.结论在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达了弓形虫SAG1基因的截短片段,表达蛋白能被弓形虫免疫兔血清及弓形虫感染人血清识别,有望成为一种有价值的诊断抗原.
关键词：弓形虫SAG1纯化免疫印迹ELISA
分类号：R382.5(医学寄生虫学)Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：广东省重大科技攻关项目(A1090205)广东省广州市科技攻关项目(2002Z-T24011)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 412-414 )
英文信息