应用70 mer Oligo基因芯片从限制性cDNA片段中钓取目的基因
石嵘1
马文丽1
刘翠华1
宋艳斌1
吴清华1
郭秋野1
郑文岭2
1.第一军医大学分子生物学研究所,广东,广州,5105152.广州军区广州总医院医学实验科,广东,广州,510010
摘要：目的探讨采用单一探针寡核苷酸阵列从经限制性显示方法制备的cDNA片段中钓取目的基因片段的方法.方法酵母经常规培养,抽提mRNA逆转录成cDNA后,经限制性显示技术制备成限制性cDNA片段,根据目的基因SSA1设计70mer特异性oligo片段并打印成为寡核苷酸阵列.采用荧光标记的通用引物对上述经限制性显示技术获得的限制性cDNA片段进行标记,与oligo阵列杂交,洗脱,扫描.然后进行杂交后剥除,收集剥除液,采用限制性通用引物扩增,产物克隆于PUC18 T载体中,并转化至JM109大肠杆菌中培养,抽提质粒,进行测序鉴定.结果测序结果BLAST同源性比较表明,用该方法成功的克隆出了目的基因片段.结论采用70mer寡核苷酸芯片可以直接从限制性显示方法处理的cDNA片段中钓取目的基因,而无需构建cDNA文库.另外,本方法也可用于oligo芯片的杂交后对有表达差异的基因的获取及研究中.
关键词：基因芯片RD-PCR荧光标记芯片剥除
分类号：Q754(分子遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(39880032)广州市科技攻关计划(99202201)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 738-741 )
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