PcDNA4/His C-MBL表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达
白志军
张丽芸
林佐贤
卢晓
陈政良
1.第一军医大学免疫学教研室,广东,广州,5105152.第一军医大学免疫学教研室,广东,广州,5105153.第一军医大学免疫学教研室,广东,广州,5105154.第一军医大学免疫学教研室,广东,广州,5105155.第一军医大学免疫学教研室,广东,广州,510515
摘要：目的构建PcDNA4/His C-MBL表达载体,在哺乳细胞中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL).方法应用PCR从含有中国人野生型MBL cDNA的质粒pGEM-MBL中扩增目的基因片段,将其克隆至PcDNA4/His C真核表达载体.经酶切及测序鉴定后,以电穿孔法转染CHO细胞,以RT-PCR分析其mRNA表达,通过Ni-NTA琼脂糖柱层析纯化目的蛋白并以SDS-PAGE和Western-blotting鉴定,以其为免疫原免疫小鼠后取鼠血清进行ELISA检测分析目的蛋白的免疫活性.结果从pGEM-MBL中扩增得到约750 bp的cDNA片段,构建成重组载体经酶切出现约5 100和750 bp片段,测序鉴定与预期的完全一致.RT-PCR证实转染细胞有MBLmRNA表达,纯化蛋白经SDS-PAGE电泳可见约29000、58 000和87 000条带,其中29 000蛋白带可与6-His抗体反应.纯化蛋白免疫小鼠所获抗血清ELISA效价是1:819 200,与天然人MBL和重组MBL三聚体糖识别域反应的ELISA效价均为1:25 600.结论获得了表达中国人MBL的CHO细胞株和重组人MBL,为MBL分子的进一步研究提供了条件.
关键词：甘露聚糖结合凝集素表达载体CHO细胞
分类号：R392.1(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(39970286)广东省自然科学基金(015003)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 859-863 )
英文信息