人survivin的克隆、在大肠杆菌中的表达及活性鉴定
别俊1
孙茂盛2
孙强明2
郑建平3
孙雯佳2
1.昆明医学院研究生部,云南,昆明,6500312.中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所分子生物室,云南,昆明,6501183.昆明市延安医院,云南,昆明,650023
摘要：目的在原核中高效表达及活性鉴定重组人survivin蛋白分子.方法应用RT-PCR的方法得到survivin的cDNA,并构建成pBV220-survivin原核表达质粒,将其导入E.coli B121(Gold)中,诱导表达survivin蛋白.通过DEAE SepharoseFastFlow离子交换柱和Sephacryl S-200分子筛二步柱纯化以获取目的蛋白.用Western blotting检测表达产物.结果PT-PCR产物经测序分析与预期结果完全一致,表达质粒在E.coli B121(Go1d)中得到高效表达,表达的survivin蛋白占总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在.通过离子交换柱和分子筛二步柱纯化及复性后获得的目的蛋白,其纯度达到95%以上.Western blotting证明表达产物具有特异性.结论获得了较高纯度的survivin蛋白,为进一步深入研究该蛋白的细胞凋亡调控功能提供了工具.
关键词：sunvivin克隆基因表达纯化
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 913-916 )
英文信息