人Aβ42重组抗原的融合表达及Aβ抗体的检测
张革1
王烈峰2
汪华侨2
姚志彬2
1.中山大学药学院分子生物实验室,广东,广州,510089;中山大学医学院人体解剖教研室脑研究室,广东,广州,5100892.中山大学医学院人体解剖教研室脑研究室,广东,广州,510089
摘要：目的原核表达β-淀粉样蛋白(Aβ42)抗原,建立检测Aβ抗体的间接ELISA技术.方法化学合成Aβ42基因两个互补片段,通过PCR构建人Aβ42基因,克隆至pGEX-2T表达载体中,原核表达并亲和纯化GST-Aβ42融合蛋白.Western blotting检测其抗原特异性.以GST-Aβ42和Aβ42肽分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ42免疫的大鼠血清中Aβ抗体.结果原核表达的可溶性GST-Aβ42融合蛋白相对分子质量为31 000,经亲和纯化后,融合蛋白产量为800 mg/L菌液,纯度大于95%;Westem blotting证实纯化的融合抗原与Aβ单抗特异反应;以GST-Aβ42为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ抗体灵敏度为2 ng/ml;以GST-Aβ42和化学合成的Aβ42分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ42肽免疫大鼠血清中Aβ抗体滴度,两者比较差异无显著性(P＞0.05).结论原核表达的GST-Aβ42融合蛋白可替代昂贵的化学合成的Aβ42肽抗原,用于检测Aβ抗体.
关键词：淀粉样β蛋白融合表达基因表达克隆分子酶联免疫吸附测定
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)R329.1(人体形态学)
资助基金：国家自然科学基金(30400512)广东省自然科学基金(20013137)广东省自然科学基金(043002180)广州市科技攻关计划(2004Z3-E0151)国家科技攻关计划(4209606)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 160-164 )
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