体外拼装凋亡素基因
陈学清1
王亚东1
孙勇1
段佑才2
马高峰1
1.南方医科大学南方医院消化内科,广东,广州,5105152.广东省第二人民医院,广东,广州,510317
摘要：目的以凋亡素基因为例,探讨用寡核苷酸片段体外拼装基因的方法.方法按已知的凋亡素基因序列(GeneBank登录号:AYl71617),设计40 bp的凋亡素基因寡核苷酸片段,并将其中的172位(BglⅡ,agatct→agatcc)和306位碱基(Hind Ⅲ,aagctt→aatcct)进行同义突变,Taq消除这两个酶切位点.在pfu酶的PCR系统中,对寡核苷酸片段进行拼装和扩增.产物稀释后进一步纯化扩增,在Tag酶存在的条件下对产物两末端加T,然后TA克隆于pGEM-T easy载体中.阳性克隆经测序鉴定.结果凋亡素基因寡核苷酸片段第1次PCR拼装后,产物呈拖尾状.但产物经进一步稀释,并用两未端引物进行2次扩增后,即可见明确的产物带及其他梯形带状产物.目的产物TA克隆后,筛选得到阳性克隆,其经测序鉴定,与设计的凋亡素基因序列完全一致.结论体外基因拼装法是一种非常有效的基因克隆方法,可用于基因或载体的合成,及一次性对基因进行广泛的突变.
关键词：基因拼装凋亡素聚合酶链式反应
分类号：R392.11(医学免疫学)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 195-197 )
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