应用抗SjP38的单克隆抗体建立血吸虫感染的胶体金免疫层析检测体系
吴锦雅
杨培良
周晓红
李华
陈晓光
1.南方医科大学寄生虫学教研室,广东,广州,5105152.南方医科大学寄生虫学教研室,广东,广州,5105153.南方医科大学寄生虫学教研室,广东,广州,5105154.南方医科大学寄生虫学教研室,广东,广州,5105155.南方医科大学寄生虫学教研室,广东,广州,510515
摘要：目的建立一种检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析方法.方法将已获得的单抗用protein-G亲和层析纯化,通过间接ELISA测定每株单抗的亲和常数.按改良过碘酸钠标记法,8株单抗标记辣根过氧化物酶(HRP)后进行不同株单抗配对,选出亲和力高、稳定性强的单抗配对组合.胶体金标记4株抗体,选择最佳反应模式,建立胶体金免疫层析方法,并对弓形虫感染鼠血样、血吸虫感染前和感染后2、3、4、5、6周的鼠血样进行检测.结果 8株抗SjP38单克隆抗体经纯化后纯度达95%以上,其亲和常数介于1×10-8mol/L～2.82×10-10mol/L.根据配对实验,1A6与9H6、1A6与9G7、6G12与9H6、6G12与9G7以及9H6与9G7为最佳配对组合.标记1A6、6G12、9H6与9G7这4株单抗后筛选出最佳反应模式,即以9G7为包被抗体,包被浓度为2.5μg/μl;当1A6为金标抗体,抗体稀释浓度为1:4时,检测效果最佳.对rSjp38的最低检测量为12.5 ng/ml.抗检测感染3、4、5、6周小鼠血清,阳性率分别为40%、50%、60%、80%,而弓形虫感染鼠和血吸虫感染前小鼠血样的检测结果为100%阴性.结论通过抗体配对、最佳包被量和金标抗体稀释倍数条件的优化,建立了快速、简便、特异的胶体金免疫层析方法,自制的rSjP38试纸条能检测血吸虫早期感染鼠血清中的循环抗原SjP38.
关键词：血吸虫日本p38单克隆抗体胶体金免疫层析方法
分类号：R181.2(流行病学与防疫)
资助基金：WHO/TDR研究基金(A990310)WHO/TDR研究基金(A00191)广东省科技专项基金(2001A1090205)广东省广州市科技攻关项目(200223-T24011)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 538-541 )
英文信息