重组腺相关病毒介导内皮抑素的表达及体外活性研究
李晓华
李湘平
李刚
刘雄
1.南方医科大学南方医院耳鼻喉科,广东,广州,5105152.南方医科大学南方医院耳鼻喉科,广东,广州,5105153.南方医科大学南方医院耳鼻喉科,广东,广州,5105154.南方医科大学南方医院耳鼻喉科,广东,广州,510515
摘要：目的构建携带人内皮抑素基因的重组腺相关病毒rAAV-hEndo,介导其体外表达并检测其生物活性.方法采用无需包装辅助病毒的双质粒共转染方法制备rAAV-hEndo,测定其滴度及感染效率.免疫荧光染色检测内皮抑素蛋白在体外感染细胞中的表达,并通过MTT法、细胞周期检测及TUNEL法检测细胞凋亡指数,观察其对人脐静脉内皮细胞ECV304的影响.结果所制备的重组腺相关病毒滴度为2×1012vg/ml,感染效率达98%.免疫荧光染色显示内皮抑素蛋白主要表达于细胞胞质.rAAV-hEndo感染细胞培养上清对ECV304细胞72 h增殖抑制率为67.3%.内皮细胞转染内皮抑素基因后细胞周期明显阻滞于G1期,其G1期占(72.5±4.0)%,与对照组(52.1±2.1)%比较有显著差异(P＜0.01).TUNEL法检测实验组内皮细胞凋亡指数为(32.6±3.2)%,与对照组(4.2±1.9)%比较有显著差异(P＜0.01).结论所制备的重组腺相关病毒rAAV-hEndo能有效介导具有生物活性的内皮抑素表达,为进一步肿瘤抗血管生成基因治疗动物实验奠定了基础.
关键词：内皮抑素腺相关病毒基因表达生物活性
分类号：Q75(分子遗传学)R394.2(医学遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(30471945)广东省自然科学基金(04020406)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 651-654 )
英文信息