突变低氧诱导因子1α基因真核表达载体的构建和表达
傅锐斌1
吴平生2
宋云峰1
邱建1
戴铁英2
李建华2
修建成2
1.广州军区广州总医院心内科,广东,广州,5100102.南方医科大学南方医院心内科,广东,广州,510515
摘要：目的构建人低氧诱导因子-1α(HIF-1α)真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α的两种突变体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala和pcDNA3.1+-HIF-1αt-564Ala-803Ala,并检测它们在人肺微血管内皮细胞(HMVECs)中的表达.方法用定点突变的方法将pcDNA3.1+-HIF-1α的HIF-1α第564位脯氨酸(Pro)密码子CCC突变为丙氨酸(Ala)密码子GCC,构建成单个突变HIF-1α真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala.在第一次突变的基础上,仍然用定点突变的方法将pcDNA3.1+-HIF-1αt-564A1a的HIF-1α-564Ala第803位天冬酰胺(Asn)密码子ATT突变为丙氨酸(Ala)密码子GCT,构建成双个点突变HIF-1α真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala-803Ala.将3种HIF-1α表达载体用脂质体法分别转入HMVECs,以RT-PCR、免疫荧光法和Western blotting法分别对转染细胞进行表达分析.结果测序证实,定点突变成功,构建成重组真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala和pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala-803Ala;3种载体均能表达相应的蛋白和mRNA,但转化突变HIF-1α表达载体的细胞蛋白量比空白细胞和转化无突变HIF-1α载体的细胞显著增加.结论成功构建能够在HMVECs中表达的单个和双个点突变的HIF-1α基因的真核表达载体.
关键词：低氧诱导因子-1α定点突变真核表达载体血管新生
分类号：R-33(实验医学、医学实验)
资助基金：中国科学院项目（非规范项目）(30370587)广东省科技厅科技项目(C31206)
论文发表日期：2005-11-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1348-1351 )
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