小鼠B淋巴瘤A20细胞株mCD99L2基因表达检测及真核表达载体构建
沈丽佳
方唯意
谢思明
何滢
蒋会勇
赵彤
1.南方医科大学南方医院病理科,广东,广州,5105152.南方医科大学南方医院病理科,广东,广州,5105153.南方医科大学南方医院病理科,广东,广州,5105154.南方医科大学南方医院病理科,广东,广州,5105155.南方医科大学南方医院病理科,广东,广州,5105156.南方医科大学南方医院病理科,广东,广州,510515
摘要：目的检测及克隆小鼠B淋巴瘤A20细胞株mCD99L2基因,构建真核表达载体.方法设计寡核苷酸探针,应用原位分子杂交方法检测A20细胞中mCD99L2基因的mRNA表达,RT-PCR法从A20细胞总RNA中获取mCD99L2基因含编码区全长cDNA,克隆入T载体,筛选阳性克隆、酶切鉴定并经序列测定;设计含酶切位点的PCR引物,PCR获取含mCD99L2基因编码区片段,用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切取所需目的片段,利用分子克隆技术与pcDNA3.1/MycHis C(+)质粒重组,对产生的重组子进行PCR、双酶切鉴定,并经过测序证实.结果原位杂交方法检测A20细胞中mCD99L2基因mRNA呈阳性表达;RT-PCR法成功获得mCD99L2基因编码区全长cDNA序列,DNA序列测序结果与GenBank提供的已知序列(NM_138309)比较,结果完全一致;重组质粒pcDNA3.1-mCD99L2中的插入片段经DNA测序后与GenBank中mD99L2基因相应序列比较,100%同源.结论小鼠B淋巴瘤A20细胞株存在mCD99L2基因,采用RT-PCR和T-A技术克隆了A20细胞的mCD99L2基因,成功构建了pcDNA3.1-mCD99L2真核表达载体,为下一步探索mCD99L2基因在小鼠B淋巴瘤A20细胞株中的功能奠定了实验基础.
关键词：淋巴瘤A20细胞株mCD99L2基因克隆真核表达载体
分类号：R733.4(造血器及淋巴系肿瘤)
资助基金：广东省博士启动基金(020024)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 144-149 )
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