巢蛋白的克隆、表达、抗体制备及免疫组化分析
陈新林1
刘勇1
肖新莉1
张瑾1
吕海侠2
张蓬勃3
刘建新1
赵建军1
1.西安交通大学医学院,神经科学研究中心,陕西,西安,710061;西安交通大学医学院,环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西,西安,7100612.第二附属医院,陕西,西安,7100043.西安交通大学医学院,神经科学研究中心,陕西,西安,710061;第二附属医院,陕西,西安,710004
摘要：目的在原核系统中克隆、表达并纯化巢蛋白(nestin),制备特异性nestin抗体,用于研究nestin在中枢神经系统发育中的生物学特性,探索神经发育及再生规律.方法采用RT-PCR方法由人神经干细胞中获取nestin cDNA,与原核表达载体pQE30连接,构建重组载体pQE30-nestin.测序后,将重组质粒转入大肠杆菌M15,IPTG诱导表达His融合蛋白.Ni-NTA亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定.用此蛋白免疫BALB/c小鼠,获得抗血清.Western blotting、ELISA和免疫组织化学分析鉴定获取的抗血清.结果成功由人神经干细胞中克隆nestin cDNA片段.IPTG诱导重组质粒pQE30-nestin表达出一相对分子质量约25 000的His融合蛋白并被Ni-NTA成功纯化,Western blotting证明其确为nestin蛋白.动物免疫后,经Western blotting、ELISA和免疫组化鉴定,获得的抗血清可特异性结合重组nestin蛋白、发育期人及大鼠脑内的nestin蛋白.结论获得了重组人nestin蛋白,制备的抗血清不仅可识别重组nestin蛋白,亦可识别人及大鼠脑组织内的nestin蛋白.
关键词：巢蛋白分子克隆原核表达抗体免疫组织化学
分类号：R339.35(人体生理学)
资助基金：中国科学院项目（非规范项目）(30300109)中国科学院项目（非规范项目）(30170300)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 196-200 )
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