人微小抗肌萎缩蛋白基因转染大鼠骨髓间充质干细胞及其基因表达
王淑辉1
张成2
陈松林1
于美娟3
张雅妮1
李美山1
熊符3
尚延昌1
冯善伟1
申本昌1
1.中山大学附属第一医院神经内科,广东,广州,5100802.中山大学附属第一医院神经内科,广东,广州,510080;中山大学干细胞与组织工程研究中心,广东,广州,5100803.中山大学干细胞与组织工程研究中心,广东,广州,510080
摘要：目的构建人微小抗肌萎缩蛋白基因(microdystrophin)的真核表达载体,转染大鼠骨髓间充质干细胞(rMSC),研究其体外表达情况.方法限制性酶切PBSK-MICRO质粒的微小抗肌萎缩蛋白基因片段,插入到真核表达质粒pcD-NA3.1(+)的NotⅠ位点内,克隆出真核表达载体pcDNA3.1(+)/microdystrophin.通过酶切和测序对质粒进行鉴定.用脂质体将重组质粒转染入rMSCs中,经过G418筛选后,用RT-PCR及间接免疫荧光技术检测表达产物.结果pcDNA3.1(+)/micro dystrophin经过NotⅠ、HindⅢ酶切鉴定及测序证实插入片断正确.提取转染重组质粒rMSCs的总RNA,进行RT-PCR可见mRNA的转录;对G418筛选后rMSCs进行免疫荧光检测可见细胞内亮丽的红色荧光,说明转染后的rMSCs有微小抗肌萎缩蛋白的表达.结论成功构建了人microdystrophin基因真核表达载体,将其转染入rMSCs内有微小抗肌萎缩蛋白的表达,为进一步研究体外修饰自体干细胞移植治疗DMD奠定了基础.
关键词：微小抗肌萎缩蛋白基因真核表达转染骨髓间充质干细胞
分类号：R329.24(人体形态学)
资助基金：中国科学院项目（非规范项目）(30370510)广东省博士启动基金(31693)卫生部临床重点项目(2001321)广东省博士启动基金(20030558058)教育部高校骨干教师资助计划(082004)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 261-265 )
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