一种基于HIV-1 TAT蛋白质转导结构域细胞内转导系统的成功改建
郭爱华
刘志锋
孙学刚
李海玉
邓鹏
姜勇
1.南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105152.南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105153.南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105154.南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105155.南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105156.南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,510515
摘要：目的探索本室构建的pET14b-His-TAT-Flag重组载体表达的融合蛋白在细胞中转导效率低的原因,建立高效的细胞内转导系统.方法通过PCR方法去除原有载体中的Flag序列,在改建正确的pET14b-His-TAT重组载体基础上插入EGFP编码序列,将经酶切、DNA测序鉴定正确的pET14b-His-TAT-EGFP质粒转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达、SDS-PAGE鉴定正确,再经蛋白透析、过滤处理.将His-TAT-EGFP融合蛋白加入ECV304细胞中,用荧光显微镜观察.结果重组质粒pET146-His-TAT融合表达载体和pET14b-His-TAT-EGFP重组载体经酶切、DNA测序鉴定证实构建成功.表达纯化出了高纯度His-TAT-EGFP融合蛋白并具有较高细胞内转导活性.结论成功改建pET14b-His-TAT-Flag重组载体,正确构建pET14b-His-TAT-EGFP载体,His-TAT-EGFP融合蛋白高效表达,并具有明确的细胞内转导活性.
关键词：HIV-1反式激活因子蛋白质转导结构域融合蛋白细胞内转导
分类号：Q2(细胞生物学)
资助基金：国家科技攻关计划(2001AA234061)广东省科技厅科技项目(A1090202)广东省自然科学基金(13058)广州市科技计划(2001-z-035-01-1)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 545-548 )
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