基于细胞穿透肽技术对p38丝裂原活化蛋白激酶蛋白功能的研究
杨丽萍
刘志锋
黎永明
李志杰
姜勇
1.南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105152.南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105153.南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105154.南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105155.南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,510515
摘要：目的构建基于TAT技术的p38 MAPK蛋白转运系统并对导入细胞的融合蛋白的功能进行鉴定.方法采用亚克隆方法构建重组质粒pHis-TAT-p38和pHis-TAT-p38(AF)无活性突变体,并诱导原核表达纯化融合蛋白;将这两种蛋白加入培养的ECV304细胞,在高渗刺激下,通过检测p38底物ATF2的磷酸化水平,以观察由TAT转导进入细胞His-TAT-p38及其无活性突变体对内源性p38活性的影响.结果酶切和测序结果表明,载体构建正确;SDS-PAGE凝胶电泳可见原核表达纯化得到高纯度目的蛋白;Westemblot表明,融合蛋白His-TAT-p38及其突变体能够以一种时间和浓度依赖性方式高效转导进入细胞;导入His-TAT-p38蛋白后,结果发现导入的野生型p38可增强内源性p38的功能,而无活性突变体则竞争性抑制了内源性p38MAPK蛋白的功能,从而阻止或抑制其对内源性底物ATF2的磷酸化,使得信号不能传递下去,进而抑制p38 MAPK通路的活动.结论成功建立了基于TAT的蛋白转运系统,并证实TAT能够以浓度和时间依赖方式高效转运蛋白进入真核细胞;进入细胞的His-TAT-p38和His-TAT-p38无活性突变体蛋白均具有较高的生物学活性,在高渗刺激作用下前者可以增加p38磷酸化水平,而后者则显著抑制p38信号通路的活性.
关键词：Ⅰ型人免疫缺陷病毒转录激活蛋白p38丝裂原活化蛋白激酶蛋白转导
分类号：Q2(细胞生物学)
资助基金：广东省科技厅科技计划(A1090202)广东省广州市科技计划(2001-z-035-01-1)广东省自然科学基金(13058)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 553-557 )
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