表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌的构建及其功能研究
李岩
鲍朗
张会东
李娅莎
朱海龙
1.四川大学华西医学中心基础与法医学院感染免疫研究室,四川,成都,6100412.四川大学华西医学中心基础与法医学院感染免疫研究室,四川,成都,6100413.四川大学华西医学中心基础与法医学院感染免疫研究室,四川,成都,6100414.四川大学华西医学中心基础与法医学院感染免疫研究室,四川,成都,6100415.四川大学华西医学中心基础与法医学院感染免疫研究室,四川,成都,610041
摘要：目的构建表达结核分枝杆菌ESAT-6基因的重组耻垢分枝杆菌并对其免疫功能进行研究.方法采用PCR技术克隆结核分枝杆菌ESAT-6基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV-ESAT6,经酶切分析和DNA测序证实连接片断的正确性后,用电穿孔法将重组质粒转染到耻垢分枝杆菌mc2155中.以SDS-PAGE检测ESAT-6蛋白在重组耻垢分枝杆菌中的表达.以重组耻垢分枝杆菌感染小鼠巨噬细胞ANA-1,半定量RT-PCR检测ANA-1细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平,裂解巨噬细胞,计数胞内存活细菌数.结果重组耻垢分枝杆菌构建成功,经热诱导后可以表达相对分子质量约为6000的蛋白,与预期值一致.重组耻垢分枝杆菌能够诱导ANA-1细胞活化表达iNOS,并增强巨噬细胞的杀伤活性,重组耻垢分枝杆菌在胞内存活数低于对照组(P＜0.05).结论表达结核分枝杆菌ESAT-6基因的重组耻垢分枝杆菌具有免疫原性,为构建新型结核疫苗提供了实验基础.
关键词：ESAT-6大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒重组耻垢分枝杆菌巨噬细胞
分类号：R378.911(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：中国科学院项目（非规范项目）(30271172)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 923-926 )
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