用FRET技术研究TLR4和MD-2的相互作用
刘亚伟
刘靖华
唐靖
赵清
李建军
赵明哲
李志杰
王国军
钟田雨
邓鹏
姜勇
1.南方医科大学基础医学院广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105152.南方医科大学基础医学院广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105153.南方医科大学基础医学院广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105154.南方医科大学基础医学院广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105155.南方医科大学基础医学院广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105156.南方医科大学基础医学院广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105157.南方医科大学基础医学院广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105158.南方医科大学基础医学院广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105159.南方医科大学基础医学院广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,51051510.南方医科大学基础医学院广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,51051511.南方医科大学基础医学院广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,510515
摘要：目的 利用荧光共振能量转移(FRET)技术在活体细胞研究人Toll样受体(TLR)4与髓样细胞分化蛋白2(MD-2)的相互作用.方法 用PCR方法扩增TLR4编码序列和MD-2编码序列(不包括信号肽序列)并分别亚克隆入带TLR4信号肽的增强型青色荧光蛋白和增强型黄色荧光蛋白表达载体(pECFP-C1-SP,pEYFP-C1-SP)中,重组质粒经酶切、序列鉴定分析后分别或共同转染HEK293细胞,用荧光显微镜观察荧光蛋白表达和分布情况,并用常规的方法和受体光漂白的方法对共表达青色荧光蛋白(CFP)-TLR4和黄色荧光蛋白(YFP)-MD-2的细胞进行FRET分析.结果 重组质粒在HEK293细胞中得到表达,仅转染pECFP/TLR4或pEYFP/MD-2的细胞可见青色或黄色荧光主要分布在胞质内,以核周较多;而共转染pECFP/TLR4和pEYFP/MD-2的细胞可同时检测到青色和黄色荧光,主要分布在细胞膜,同时胞质也有少量表达.无论是用常规的方法还是受体光漂白的方法,对共表达CFP-TLR4和YFP-MD-2的细胞进行FRET分析结果表明有FRET现象的发生,提示TLR4和MD-2有相互作用并形成复合物.结论 本研究为TLR4和MD-2在活体细胞中的相互作用提供了直接的证据.
关键词：Toll样受体4髓样细胞分化蛋白2荧光共振能量转移
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）(2002CB513005)国家自然科学基金(30270538)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1101-1105 )
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