RNA干扰热休克蛋白90α表达对NIH-3T3细胞应激反应的影响
陈雪梅
邹飞
1.南方医科大学劳动与职业卫生学系,广东,广州,5105152.南方医科大学劳动与职业卫生学系,广东,广州,510515
摘要：目的 用RNA干扰方法建立稳定的热休克蛋白90α(HSP90α)抑制表达细胞株,研究热休克蛋白90α抑制表达对细胞应激反应的影响.方法 将人Hsp90αRNA干扰基因片段连接入pSilencer2.1-U6neo载体,重组质粒pSilencerHSP90经亚克隆、纯化、测序鉴定后,用电穿孔法转染到小鼠成纤维细胞系NIH-3T3细胞内.经G418筛选、克隆分离培养,用免疫荧光、免疫印迹鉴定阳性克隆.用高温作用(44℃,40 min)模拟氧化应激环境,以NIH-3T3细胞为对照,流式细胞仪测定DNA受损细胞数,分析在细胞应激状态下对细胞膜和DNA的损害及HSP90低表达对细胞应激反应的影响.结果 转染pSilencerHSP90的NIH-3T3细胞Hsp90免疫荧光染色减弱,主要分布于胞浆;与对照相比,44℃,40 min时DNA的损害加重(9.2%vs18.5%,P＜0.01).结论 建立稳定低表达HSP90αNIH-3T3细胞株;热休克蛋白90表达与其应激保护作用密切相关.
关键词：HSP90RNA干扰转染氧化应激
分类号：R363(病理学)
资助基金：国家自然科学基金(30371575)广东省自然科学基金(05300465)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 1118-1120 )
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