小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的表达、纯化与鉴定
温茜1
马骊1
苏瑾1
罗微1
王小宁2
1.南方医科大学生物技术学院分子免疫学研究所,广东,广州,5105152.华南理工大学生物科学与工程学院,广东,广州,510641
摘要：目的 构建小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mGM-CSF)工程菌,通过摸索其变、复性和纯化条件,得到高纯度高比活的重组mGM-CSF蛋白.方法 以本实验室构建的hIL-2/mGM-CSF融合蛋白表达载体为模板,PCR扩增mGM-CSF基因,克隆入pET-11c表达载体,转化BL21,构建BL21/pET-11c/mGM-CSF工程菌,用本所专利方法提取包涵体,在含低浓度盐酸胍的复性液中复性,采用镍离子亲和层析纯化.结果 工程菌采用TH肉汤培养,32℃、0.1mmol/L IPTG双重诱导,表达量达菌体蛋白总量的60.6%.提取包涵体在含1.5mol/L盐酸胍的谷胱甘肽复性液中复性效果最好,比活达4.2×106U/mg.经过亲和层析一步纯化,目的蛋白纯度达95%,比活与标准品相当.结论 构建了高效表达mGM-CSF的工程菌,建立了其复性和纯化工艺,为进一步研究DC、GM-CSF体内抗肿瘤功能奠定了基础,并可为IL-2/GM-CSF双功能分子的生物学功能研究提供对照.
关键词：小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子表达纯化
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）(2001CB510008)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1124-1127 )
英文信息