血管内皮生长因子在原核细胞中的高效表达、纯化与活性研究
杨佩1
王坤正1
时志斌1
党晓谦1
余鹏博2
王春生1
宫福良3
1.西安交通大学医学院第二附属医院骨科,陕西,西安,7100042.陕西省疾病预防控制中心病毒室,陕西,西安,7100543.大连医科大学附属第一医院骨科,辽宁,大连,116011
摘要：目的 用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达人血管内皮生长因子(VEGF165),分离纯化并检测其免疫学以及生物学活性,为后期构建携带VEGF165蛋白的预成血管化组织工程骨提供充足的蛋白来源.方法 利用PCR亚克隆的方法获得目的基因片段,构建表达质粒pQE30-VEGF165,在大肠杆菌JM109中用IPTG进行诱导表达并使用Ni2+-NTA进行蛋白纯化.酶联免疫吸附(ELISA)和Western blot技术检测纯化的VEGF165蛋白免疫学活性,鸡胚尿囊绒毛膜实验和matrigel血管形成实验检测其生物学活性.结果 重组表达质粒pQE30-VEGF165在大肠杆菌中成功的表达了相对分子质量为23000的蛋白,该蛋白以不溶性包涵体的形式存在,占菌体总蛋白的30%左右.经过分离和Ni柱纯化获得了VEGF165蛋白,浓度约为0.2 mg/ml,ELISA和Western blot实验显示其具有良好的免疫学活性,鸡胚尿囊绒毛膜实验和matrigel血管形成实验显示所表达的蛋白具有良好的生物学活性.结论 本实验在原核细胞中稳定、高效的表达了具有活性的VEGF165蛋白,为后期预购血管化组织工程骨的构建提供了充足的蛋白来源.
关键词：血管内皮生长因子表达纯化
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家自然科学基金(30371443)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1263-1268 )
英文信息