重组人TFF2乳酸链球菌表达载体pTRTFF2的构建
邢锐
杨晓强
陈学清
张振书
1.南方医科大学南方医院消化病研究所,广东,广州,5105152.南方医科大学南方医院消化病研究所,广东,广州,5105153.南方医科大学南方医院消化病研究所,广东,广州,5105154.南方医科大学南方医院消化病研究所,广东,广州,510515
摘要：目的 构建带c-myc分子标签的人三叶因子家族2(hTFF2)融合基因c-myc-hTFF2的乳酸链球菌表达载体,以便进一步构建能表达活性c-myc-hTFF2融合蛋白的乳酸链球菌工程菌.方法 根据hTFF2的氨基酸表达序列和乳酸链球菌的氨基酸密码子,以c-myc作为分子标签,设计c-myc-1 TFF2的cDNA序列,并在其5'端和3'端添加SalⅠ和BamHI酶切位点;将目的基因片段设计成14个相互互补的寡核苷酸,经聚合酶链式反应,得到目的基因c-myc-hTFF2;将c-myc-hTFF2连入pBluescriptⅡsk(+)载体,构建其克隆载体pBS-TFF2并进行酶切鉴定及DNA测序;分别用SalⅠ/BamHI和XhoⅠ/BamHI对pBS-TFF2和pNBC1000进行双酶切反应,再通过连接反应将c-myc-hTFF2融合基因插入pNBC1000,构建c-myc-hTFF2大肠杆菌表达载体(pNTFF2);用XbαⅠ对pNTFF2和穿梭载体pTRKH2单酶切反应,并通过连接反应将c-my-hTFF2的表达载体连入穿梭载体pTRKH2,完成乳酸链球菌表达载体pTRTFF2的构建,并进行酶切鉴定.结果 成功构建了c-myc-hTFF2的乳酸链球菌表达载体pTRTFF2.结论 体外基因拼装是构建目的基因有效的方法;pTRTFF2的构建为构建乳酸链球菌工程菌奠定了基础.
关键词：基因拼装三叶肽融合基因克隆载体表达载体
分类号：Q939.11(微生物分类学（系统微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(30570839)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1280-1283 )
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