重组结核分枝杆菌ESAT6-PPE68融合蛋白的制备
李红霞1
陈建平1
曾林子2
刘刚3
姚卫4
杨筠3
刘杨椅3
王涛1
田玉1
1.四川大学,华西医学中心基础医学与法医学院寄生虫学教研室、病原生物学实验室,四川,成都,6100412.四川大学,生命科学学院,四川,成都,6100413.四川省疾病预防控制中心结核病预防控制所,四川,成都,6100414.四川绵阳市疾病预防控制中心,四川,绵阳,621000
摘要：目的 构建结核分支杆菌esat6-ppe68融合基因及其原核表达载体,在大肠杆菌中表达融合蛋白ESAT6-PPE68.方法 用基因拼接(GeneSOEing)法扩增esat6-ppe68融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒pGesat6-ppe68.重组子经限制性内切酶分析、聚合酶链式反应及测序鉴定后转化宿主菌大肠杆菌BL21,IPTG(异丙基-β-D硫代半乳糖苷)诱导表达约69 000带谷胱苷肽硫转移酶蛋白(GST)标签的正SAT6-PPE68融合蛋白,经谷胱苷肽-硫-转移酶融合蛋白纯化试剂盒得到纯化的融合蛋白,产物进行SDS-PAGE电泳、Western-blotting鉴定.结果 重组质粒pGesat6-ppe68中目的基因测序结果与报道序列完全相同;在大肠杆菌中以可溶性非包涵体形式表达;表达量约占菌体总蛋白的40%,表达蛋白纯化后获得纯度为90%左右的重组蛋白;Westernblotting结果证实重组蛋白与确诊的结核病患者血清发生特异免疫反应.结论 成功构建了原核表达载体pGesat6-ppe68,获得了rESAT6-PPE68融合蛋白,为rESAT6-PPE68融合蛋白在结核病诊断中的应用奠定了基础.
关键词：结核分枝杆菌esat6-ppe68融合基因rESAT6-PPE68融合蛋白原核表达
分类号：R3(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(39870656)四川省学术与技术带头人培养项目(4200316)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 131-135 )
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