利用原核表达系统制备肾癌相关抗原G250/MN/CA Ⅸ
姜耀东1
郑少斌1
谭万龙1
赵善超1
任非2
张宝3
1.南方医科大学南方医院泌尿外科,广东,广州,5105152.南方医科大学南方医院药材科,广东,广州,5105153.南方医科大学分子生物研究所,广东,广州,510515
摘要：目的 利用原核表达系统制备肾癌相关抗原G250/MN/CA Ⅸ.方法 采用PCR法从原有质粒中扩增G250/MN/CA Ⅸ全长编码序列,将获得的编码序列片段插入pET32a(+)表达载体,转化Rosseta大肠杆菌,IPTG诱导蛋白表达,而后进行纯化及Western blot鉴定.结果 正确构建pET32a(+)/G250重组质粒,重组质粒转化Rosseta菌后,经IPTG诱导,在58 000相对分子质量处有明确的条带.目的蛋白表达占菌体总蛋白的32.7%.89.9%的重组蛋白是可溶性的.Western blot结果显示纯化后的蛋白可以与G250单克隆抗体M75特异性结合.结论 在原核系统中成功进行G250/MN/CAⅨ的高效表达,为下一步的单克隆抗体制备和蛋白功能研究奠定了基础.
关键词：肾肿瘤G250/MN/CA Ⅸ抗原克隆原核表达载体
分类号：R394.2(医学遗传学)R737.11(泌尿生殖器肿瘤)
资助基金：广东省医学科学技术研究项目(A2004395)广东省医学科学技术研究项目(B2006102)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 307-309 )
英文信息