应用FDDRT-PCR技术研究低剂量过氧化氢诱导细胞适应性反应的基因差异表达
卫秦芝1
庄志雄2
1.南方医科大学公共卫生与热带医学学院毒理学系,广东,广州,5105152.深圳市疾病预防控制中心,广东,深圳,518020
摘要：目的 用荧光差异显示RT-PCR(FDDRT-PCR)技术寻找低剂量的过氧化氢(H2O2)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)适应性反应差异表达的基因,为进一步研究低剂量的环境化学污染物(ECPs)诱导机体的生物学效应及其机制提供科学依据.方法 依据H2O2对MRC-5毒性的剂量反应关系,选择低剂量和高剂量,并建立低剂量H2O2诱导MRC-5的适应性反应模型.用乳酸脱氢酶漏出率(LDH%)、Annexin V/PI检测细胞凋亡验证适应性反应模型.然后用FDDRT-PCR寻找不同方式刺激下差异表达的基因,鉴定和验证部分差异表达的基因.结果 MTT获得适应性反应的模型,乳酸脱氢酶漏出率和Annexin V/PI检测细胞凋亡的结果都验证了适应性反应的模型.对不同方式处理的细胞RNA进行FDDRT-PCR,找到60个差异条带.对其中的5个差异条带进行鉴定,发现其中4个已知基因(bcl-2、EIF3S5、NDUFS4、RPS10),1个新基因.荧光定量PCR技术证实5个基因在不同处理组中的表达与荧光差异显示PCR图谱上一致.结论 低剂量H2O2可以诱导MRC-5的适应性反应过程,其中bcl-2、EIF3S5、NDUFS4、RPS10在该过程中起着一定的作用.
关键词：荧光差异显示PCR过氧化氢适应性反应基因差异表达
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）(2002CB512904)国家自然科学基金(30600513)广东省自然科学基金(06301143)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 760-765 )
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