PAK6基因的克隆、抗体制备及在前列腺癌中的表达
韩宇晶1
安政雯2
杨金星3
李俊4
罗荣城3
张宏权5
1.南方医科大学南方医院,肿瘤科,广东,广州,510515;中山大学肿瘤研究中心,广东,广州,5100602.南方医科大学南方医院,口腔科,广东,广州,510515;Karolinska Institute,Department of Bioscinces and Nutrition,Sweden Huddinge3.南方医科大学南方医院,肿瘤科,广东,广州,5105154.南方医科大学南方医院,中医内科,广东,广州,5105155.Karolinska Institute,Department of Bioscinces and Nutrition,Sweden Huddinge
摘要：目的 在克隆P21相关激酶6(PAK6)全长cDNA的基础上,进一步克隆PAK6-N端基因并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化基因产物并进行多克隆抗体制备,为研究PAK6与疾病的关系奠定基础.同时研究PAK6在前列腺癌中的表达.方法 根据人全长PAK6 cDNA序列,设计PCR引物,以人前列腺癌cDNA文库为模板利用PCR技术克隆PAK6全长cDNA.在此基础上,以PAK6全长cDNA为模板克隆PAK6-N端基因,将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1中,经EcoRI/XhoI双酶切鉴定后,进行DAN序列测定.GST-PAK6-N融合蛋白在硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下在大肠杆菌BL21中得到表达.利用G1utothione亲和层析纯化融合蛋白,用纯化的GST-PAK6-N融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并用纯化的抗PAK6多克隆抗体在3例前列腺癌病人标本中进行了免疫组化表达的初步研究.结果 成功克隆了PAK6全长cDNA和PAK6-N端基因片断,在E.coli中表达了PAK6-NT,纯化了GST-PAK6-N融合蛋白,并制备了PAK6特异性抗体.免疫组织化学研究表明:3例前列腺癌患者石蜡包埋病理组织切片免疫组化染色全部表现为间质阳性,PAK6在前列腺癌间质中呈现表达,而前列腺癌细胞则不染色.结论 首次克隆了PAK6全长cDNA和PAK6-N端基因片断并成功制备了PAK6特异性抗体,为深入探讨PAK6在前列腺癌中的作用奠定了基础.初步揭示PAK6在前列腺癌的表达
关键词：PAK6基因克隆蛋白表达多克隆抗体前列腺肿瘤
分类号：R394.2(医学遗传学)R737.25(泌尿生殖器肿瘤)
资助基金：广东省科技厅科技项目(200520070056)瑞典医学会资助项目(17450)瑞典癌症基金会资助项目(050373)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 827-830 )
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