沉默组织因子重组腺病毒的构建和胰岛中沉默效果检测
李钊伦
薛武军
田普训
丁小明
田晓辉
冯新顺
侯军
1.西安交通大学医学院第一附属医院肾移植科,陕西,西安,7100612.西安交通大学医学院第一附属医院肾移植科,陕西,西安,7100613.西安交通大学医学院第一附属医院肾移植科,陕西,西安,7100614.西安交通大学医学院第一附属医院肾移植科,陕西,西安,7100615.西安交通大学医学院第一附属医院肾移植科,陕西,西安,7100616.西安交通大学医学院第一附属医院肾移植科,陕西,西安,7100617.西安交通大学医学院第一附属医院肾移植科,陕西,西安,710061
摘要：目的 构建复制缺陷型重组腺病毒介导短发夹RNA(shRNA):干扰组织因子(TF)在胰岛表达.方法 设计并合成四对单链寡核苷酸(ss oligo),经变性退火为双链寡核苷酸(ds oligo)插入穿梭质粒pENTR/U6载体,测序正确后经脂质体介导入成人胰岛,通过实时定量RT-PCR方法筛选对TF沉默效果最佳穿梭质粒pENTR/U6-shRNA,然后与腺病毒骨架质粒行同源重组.筛选出正确重组子,用293A细胞包装出表达TF-shRNA的复制缺陷型重组腺病毒并测定其病毒滴度.通过实时定量RT-PCR腺病毒沉默TF效果予以检测.结果 测序结果提示所构建的pENTR/U6-shRNA质粒正确,并从四对ds oligos筛选出对组织因子沉默效果最佳的穿梭质粒pENIR/U6-shRNA,经同源重组后成功构建了介导shRNA-TF复制缺陷型重组腺病毒.转染胰岛后,通过实时定量RT-PCR方法检测发现shRNA-TF腺病毒感染胰岛后对TF mRNA的沉默效果4 d后达最佳效果,为54.29%(P＜0.05 vs NC).结论 成功构建的介导shRNA复制缺陷型重组腺病毒可以体外抑制胰岛细胞中组织因子的表达.
关键词：重组腺病毒组织因子短发夹RNA(shRNA)胰岛基因沉默
分类号：R587.1(内分泌腺疾病及代谢病)R617(外科手术学)
资助基金：卫生部临床学科重点项目(30571799)高等学校博士学科点专项科研基金(20050638033)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1299-1302 )
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