分化抑制因子1相互作用蛋白AGGF1的筛选
贾思远1
罗向东2
齐洁2
1.南方大学珠江医院烧伤科,广东,广州,5102822.第三军医大学西南医院烧伤研究所,重庆,400038
摘要：目的 利用酵母双杂交方法,筛选成人肺组织文库中与分化抑制因子1(Id1)相互作用的蛋白.方法 PCR方法扩增Id1的编码序列并定向克隆入诱饵质粒pHybLex/Zeo,构建重组诱饵质粒pHybLex/Zeo-Id1,酶切鉴定后转化人酵母株EGY48/pSH18-34,检测重组诱饵质粒有无非特异激活报告基因Leu2、LacZ作用;扩增并提取成人肺组织文库质粒,将文库质粒及重组诱饵质粒转化入酵母细胞,依次筛选Leu2+,Leu2+LacZ+克隆;设置阴性及阳性对照,重复筛选Leu2+LacZ+克隆并排除假阳性克隆,获取真阳性文库质粒,进行测序和同源性比对.结果 酶切证实,重组诱饵质粒构建成功.重组诱饵质粒转化入酵母细胞后.经检测无非特异激活报告基因作用.扩增并筛选成人肺组织文库.获得198个Leu2+及19个Leu2+LacZ+克隆.经排除假阳性克隆,最终获得1个Leu2+LacZ+真阳性克隆,经测序和同源性比较证实该克隆与蛋白AGGF1高度同源(556/559,99.5%),Westem blotting证实其在酵母细胞中有表达.结论 利用酵母双杂交方法,通过筛选成人肺组织文库,发现Id1与AGGF1存在相互作用.
关键词：分化因子1酵母双杂交内皮细胞
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：广东省博士启动基金(04300193)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 1379-1381 )
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