以EGFP为报告基因的增强子鉴定质粒载体的构建及鉴定
石秦东1
张蓬勃2
康前雁1
陈新林3
田玉梅3
刘建新3
刘勇3
1.西安交通大学医学院神经生物学研究所,陕西,西安,710061;西安交通大学医学院第一附属医院中心ICU,陕西,西安,7100612.西安交通大学医学院神经生物学研究所,陕西,西安,710061;西安交通大学医学院第二附属医院麻醉科,陕西,西安,7100043.西安交通大学医学院神经生物学研究所,陕西,西安,710061
摘要：目的 构建以EGFP为报告基因的增强子鉴定质粒载体,并对其进行鉴定.方法 以pEGFP-N1质粒为模板,PCR法扩增获得EGFP基因片段,并将其亚克隆入PGL3-promoter质粒骨架,得到以EGFP为报告基因的增强子鉴定质粒pEGFP-enhancer.人工合成不同拷贝的缺氧反应元件(HRE)增强子序列,插入到pEGFP-enhancer多克隆位点获得重组质粒pEGFP-HRE、pEGFP-5HR,以脂质体Lipofectamine 2000转染Hela细胞,常氧与缺氧处理后以荧光显微镜及流式细胞仪观察EGFP荧光表达.结果 构建的不同拷贝HRE的增强子鉴定质粒pEGFP-HRE、pEGFP-5HRE转染Hela细胞后,常氧处理绿色荧光表达无差异,缺氧处理后随HRE拷贝数增加绿色荧光表达强度增加.结论 成功构建了增强子表达质粒pEGFP-enhancer,通过EGFP的表达强度可以反应增强子活性.
关键词：增强子绿色荧光蛋白载体缺氧反应元件Hela细胞
分类号：R394.3(医学遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(30200291)陕西省科技攻关计划(2004k14-G3)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1834-1837 )
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