非分型流感嗜血杆菌Haps蛋白的分离纯化
李婉宜
邝玉
李明远
杨远
蒋中华
姚锋
陈长春
1.四川大学华西基础医学与法医学院,微生物学教研室,四川,成都,6100412.四川大学华西基础医学与法医学院,微生物学教研室,四川,成都,6100413.四川大学华西基础医学与法医学院,微生物学教研室,四川,成都,6100414.四川大学华西基础医学与法医学院,微生物学教研室,四川,成都,6100415.四川大学华西基础医学与法医学院,微生物学教研室,四川,成都,6100416.四川大学华西基础医学与法医学院,微生物学教研室,四川,成都,6100417.四川大学华西基础医学与法医学院,微生物学教研室,四川,成都,610041
摘要：目的 优化非分型流感嗜血杆菌Haps蛋白质片段的分离纯化方法.方法 采用盐析、透析脱盐、超滤浓缩、弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化Haps蛋白,优化Haps蛋白质片段的洗脱条件,包括pH值和离子强度,测定各洗脱液样品在280 nm波长处的光吸收值(D280),用折线图显示,SDS-PAGE电泳检测分布图中处于峰值的样品,观察目的 蛋白条带的出现.结果 弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化HapS蛋白,缓冲液1洗脱液的D280分布为基线,缓冲液2洗脱液的D280分布折线图中有峰值出现,但峰有拖尾,SDS-PAGE电泳检测该洗脱峰主要为低分子量的蛋白条带;五种不同离子强度的缓冲液3洗脱液在100mmol/LNaCl离子强度时,D280的分布折线图显示有较高洗脱峰出现,SDS-PAGE电泳检测该洗脱峰有较明显的110 000 D的目的 条带,其余离子强度下均未见明显洗脱峰出现.结论 Sepharose CM FF层析柱分离纯化Haps蛋白质片段时,不同pH值的缓冲液对目的 蛋白的洗脱没有明显影响,而主要影响杂蛋白的洗脱;100 mmol/L NaCl离子强度的缓冲液3洗脱液获得较好的洗脱效果.
关键词：Haps蛋白阳离子交换层析蛋白纯化
分类号：R378.41(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1880-1883 )
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