靶向hVEGF165基因shRNA质粒表达载体的构建及筛选
王卫东1
蒋立新2
徐江平3
陆兵勋3
1.南方医科大学南方医院神经内科,广东,广州,510515;国家863计划生物领域病毒基因载体研发基地,北京,1001762.国家863计划生物领域病毒基因载体研发基地,北京,1001763.南方医科大学南方医院神经内科,广东,广州,510515
摘要：目的 构建编码hVEGF165 mRNA的shRNA质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体.方法 以hVEGF165 mRNA编码区中第5和第7外显子序列作为RNA干扰靶点,分别构建3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体并通过PCR进行鉴定.经鉴定后分别转染稳定表达hVEGF165基因的BHK细胞,实时荧光定量PCR和Western blotting分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果.结果 构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出预期条带,构建成功.靶向hVEGF165基因的shRNA对所转染稳定表达hVEGF165基因的BHK细胞中hVEGF165基因mRNA和蛋白质表达均有抑制作用,其中shRNA2最为明显.结论 成功构建了靶向hVEGF165基因的shRNA质粒表达载体,其中抑制效果最为明显的shRNA质粒表达载体为pDC316-EGFP-U6-shRNA2质粒.
关键词：RNA干扰质粒表达载体短发卡样RNAhVEGF165基因
分类号：R543.1(心脏、血管（循环系）疾病)
资助基金：国家自然科学基金(30472178)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 30-33 )
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