人表皮生长因子受体Ⅲ型突变体胞外区的克隆表达和鉴定
张兴梅1
石玉生2
刘忠英3
1.南方医科大学,基础医学院神经生物教研室,广东,广州,5105152.南方医科大学,南方医院放疗科,广东,广州,5105153.南方医科大学,基础医学院组织和胚胎学教研室,广东,广州,510515
摘要：目的 构建含表皮生长因子(EGF)受体Ⅲ型突变体胞外区基因(vⅢECD)的重组质粒并进行表达和鉴定.方法 应用PCR方法扩增EGFRvⅢECD片段,将其T-A克隆和测序.再将目的基因插入GST融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达.采用双酶切鉴定插入序列的正确性,用SDS-PAGE及Western blotting分析融合蛋白的表达.结果 测序结果证实插入DNA序列与EGFR胞外区序列完全一致;双酶切鉴定表明,EGFRvⅢ ECD序列已经正确克隆到GST融合表达载体中.SDS-PAGE电泳显示融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达.重组融合蛋白GST-vⅢ ECD的表达量占菌体总蛋白的15%以上.Western blotting分析证实重组融合蛋白可以被EGFR特异性抗体所识别.结论 成功构建了融合表达载体(pGEX-4T-1/vⅢECD),并进行了融合蛋白的诱导表达和鉴定,可进一步用于EGFRvⅢ功能及免疫学研究.
关键词：表皮生长因子受体Ⅲ型突变体胞外区原核表达融合蛋白
分类号：R349.64(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30500608)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 151-153 )
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