体外拼接破伤风毒素C片段基因
杨晓强1
武金宝2
姜泊2
赵亚刚1
陈学清3
1.广州军区广州总医院消化内科,广东广州,5100102.南方医科大学南方医院消化内科,广东,广州,5105153.浙江大学附属邵逸夫医院消化内科,浙江,杭州,310016
摘要：目的 以破伤风毒素C片段(TETC)基因为例,探讨区段基因拼接方法.方法 根据已知的TETC基因序列(GenBank登记号M12739,367-1719),结合乳链菌氨基酸密码子的基因编码情况,设计适于在乳链菌内表达的TETC基因序列,为进一步克隆,根据同义突变的原理消除序列中的EcoR I和Kpn I的酶切位点,在TETC基因的5'端加上Sal I酶切位点.3'端加上Xho I和Hind Ⅲ酶切位点,序列全长1383 bp.将其中1380 bp的片段使用DNAstar 6.0设计为68条长40 bp的寡核苷酸TETC1-TETC6B,设计TETC69作为下游引物.分3个区段分别拼接TETC1-24、TETC23-46、TETC45-68,随后分别以TETC1、TETC69为上下游引物,进行TETC全长基因的拼接,将获得的TETC基因经Sal I和HindⅢ双酶切后连接到经相同双酶切的pBluescript ⅡSK(+),得到的阳性克隆经测序鉴定.结果 分别拼接出大小约500bp的TETC1-24、TETC23-46、TETC45-68,等浓度的3个区段混合后,拼接出了全长为1383 bpTETC基因,目的基因连接到载体后测序与设计的TETC基因完全一致.结论 区段基因拼接法采用分段拼接的方法先拼接出全长基因的组成部分,随后进行全长基因拼接.更适合长基因片段的体外拼接.
关键词：区段基因拼接破伤风毒素C片段
分类号：R34(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30570839)广东省自然科学基金(05004735)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 363-365,369 )
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