核干细胞因子基因siRNA表达载体的构建及鉴定
张功员1
赵国强2
尹磊1
张钦宪1
1.郑州大学基础医学院,组织学与胚胎学教研室,河南,郑州,4500522.郑州大学基础医学院,微生物学与免疫学教研室,河南,郑州,450052
摘要：目的 构建针对核干细胞因子(NS)基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体.方法 根据GenBartk提供的NS基因AY825265 mRNA序列及siRNA设计原则设计siRNA,筛选得到126-144 nt,199-217 nt和487-505 nt 3个19 bp片段为靶序列;合成带有BamHI、XhoI酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列,经过退火,将此序列克隆至载体pRNAT-U6.1中构建重组表达载体;转化DH5α,提取质粒,应用PCR技术和测序方法鉴定重组克隆.转染入食管癌EC9706细胞,检测NS基因沉默情况.结果 PCR筛选得到3个目的片段的阳性重组克隆,测序证实重组表达载体中插入序列与设计一致.RT-PCR和Western blot检测显示构建的siRNA表达载体可显著降低EC9706细胞中NS mRNA和蛋白水平的表达.结论 成功构建出一组针对NS基因的siRNA表达载体,为下一步NS基因的RNA干扰研究鉴定了基础.
关键词：核干细胞因子RNA干扰基因克隆EC9706
分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)
资助基金：河南省卫生厅科技攻关计划(72102310104)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 392-395,398 )
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