PRL-3基因RNA干扰慢病毒载体的构建及在SW480细胞中的表达
柳玉红
李建明
周军
丁彦青
1.南方医科大学南方医院病理科,南方医科大学基础医学院病理学教研室,广东省分子肿瘤病理重点实验室,教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室,广东,广州,5105152.南方医科大学南方医院病理科,南方医科大学基础医学院病理学教研室,广东省分子肿瘤病理重点实验室,教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室,广东,广州,5105153.南方医科大学南方医院病理科,南方医科大学基础医学院病理学教研室,广东省分子肿瘤病理重点实验室,教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室,广东,广州,5105154.南方医科大学南方医院病理科,南方医科大学基础医学院病理学教研室,广东省分子肿瘤病理重点实验室,教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室,广东,广州,510515
摘要：目的 构建PRL-3基因慢病毒干扰载体及建立PRL-3基因稳定干扰的结直肠癌细胞亚系.为PRb-3基因功能研究奠定基础.方法 设计PRL-3基因特异性RNAi靶序列,与pENTRTM/U6线性载体定向连接,构建pENTRTM/U6真核入门表达载体.通过与pENTRTM/U6 entry clone与pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST载体进行重组,获得pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST真核表达慢病毒干扰载体.利用包装细胞293FT获得重组的慢病毒,感染大肠癌细胞株SW480细胞,杀稻瘟菌素筛选获得稳定干扰PRL-3基因的细胞亚系.结果 成功构建PRL-3 pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒悬液的滴度为6×105U/L.RT-PCR、Western blotting结果 表明,克隆1 PRL-3mRNA及蛋白显著降低.结论 成功构建人PRL-3基因特异性的慢病毒干扰载体,获得PRL-3基因稳定干扰的大肠癌细胞亚系.
关键词：RNA干扰慢病毒PRL-3结直肠癌
分类号：R322(人体形态学)
资助基金：国家自然科学基金(30500241)国家自然科学基金(30670968)国家自然科学基金(30700286)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 509-512 )
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