重组腺病毒Ad-sTNFRI-IgGFc转染人气道上皮细胞及其表达的实验研究
苏瑾1
尤长宣1
蔡绍曦1
马骊2
温茜2
罗微2
黄泳塔2
1.南方医科大学,南方医院呼吸科,广东,广州,5105152.南方医科大学,生物技术学院分子免疫学研究所,广东,广州,510515
摘要：目的 构建携带人可溶性肿瘤坏死因子受体I胞外区和IgGFc融合基因的重组腺病毒载体(Ad-sTNFRI-IgGFc),体外转染正常人气道上皮细胞株(HBE135-E6E7),探讨重组腺病毒Ad-sTNFRI-IgGFc转染气道上皮治疗支气管哮喘的可行性.方法 将sTNFRI-IgGFc基因插入腺病毒穿梭质粒pDC316,与辅助质粒pBHGlox△E1,3Crc共转染HEK293细胞,重组产生Ad-sTNFRI-IgGFc,PCR鉴定毒种正确后,进行扩增、纯化和滴度测定,转染培养HBE135-E6E7,流式细胞术检测转染效率,RT-PCR、免疫组化检测转染后细胞中sTNFRI-IgGFc的表达和转录.结果 成功构建了Ad-sTNFRI-IgGFc,感染性滴度达3×1010TCID50/ml,转染后HBE135-E6E7在mRNA和蛋白水平均有sTNFRI-IgGFc表达.结论 构建的Ad-sTNFRI-IgGFc可有效转染HBE135-E6E7,并在其中高效表达,并能拈抗TNF活性,为将表达sTNFRI-IgGFc腺病毒基因治疗哮喘的实验研究提供了基础.
关键词：可溶性肿瘤坏死因子受体腺病毒载体气道上皮细胞支气管哮喘
分类号：R511.8(传染病)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2007AA022458)广东省科技攻关计划(2005834001004)广州市科技攻关计划(200523-E0151)广东省医学科学技术研究项目(B2005083)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 517-521 )
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